Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh penambahan berbagai level dan jenis madu monoflora terhadap kualitas spermatozoa ayam kampung dan mengetahui level dan jenis madu terbaik untuk mempertahankan kualitas spermatozoa ayam kampung. Penelitian ini menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) pola faktorial dimana faktor pertama yaitu level madu dalam pengencer (0%, 2%, 4% dan 6%) sedangkan faktor kedua yaitu jenis madu monoflora (madu randu, madu kaliandra serta madu kopi), motilitas spermatozoa diamati selama penyimpanan jam ke-0, 24, 48, 96 dan 120. Hasil penelitian menunjukkan bahwa penambahan level madu yang berbeda bepengaruh sangat nyata terhadap motilitas spermatozoa ayam kampung dan level madu terbaik yaitu 2% sampai penyimpanan 48 jam. Penambahan berbagai jenis madu monoflora berpengaruh nyata terhadap kualitas spermatozoa ayam kampung dan jenis madu terbaik yaitu madu randu dan madu kaliandra serta terdapat interaksi antara level madu dan jenis madu yang digunakan.

Kata kunci: madu, pengencer, spermatozoa, ayam kampung